睿創生物 大鼠ELISA試劑盒

　　操作流程：

　　(1)產品僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　(2)酶標板置4℃，包被過夜。

　　(3)洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

　　(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1：500稀釋的工作液50μl。

　　(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　(6)洗板，同(4)。

　　(7)每孔加1：5000稀釋的HRP-標記的工作液100μl。

　　(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　(9)洗板，同(4)。

　　(10)每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

　　(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

　　(12)分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　(13)數據處理：在得出標本(S)和陰性對照(N)的OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

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